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蛋白純化折騰半個月沒結果,快放假了老板才把原因告訴我!
  • 發布日期:2021-09-28     信息來源:      瀏覽次數:168
    • 眼瞅著十一假期越來越近,原本計劃做好實驗放飛自我,數據卻一直出不來,別人做蛋白純化幾天搞定,我做蛋白純化只能靠手動,半個月反反復復結果依舊讓人...
      只好請教老板,如何快速搞定蛋白純化實驗(文末有法寶,親測管用!!!)

      我:「老師,我選擇的是凝膠過濾色譜法,我的目標蛋白電荷密度并不高,上樣的量也不大,但分辨率就是不高,而且有好多成分我還是想回收一下但做不到。 」

      老師:「分辨率不高這個問題,首先樣品與洗脫料液比應該保持一致,其次要再檢查一下色譜柱裝填是否勻實了,這些都會影響分辨率。層析液全收集這個事兒是這樣,咱現在的儀器通路是有限的,只能收集這么多,你就盡量挑你關注的來吧。」

       

       

      我:「行吧,那實驗過程中會出現渾濁現象,這個是什么原因呢?」

      老師:「有可能是你實驗的蛋白自身不穩定,需要檢查緩沖體系是否適宜,環境是否溫度太高,你可以加入肌氨酸鈉,迅速使蛋白變性,渾濁現象會消除。」

       

       

      我:「老師,還有,還有問題,這個儀器鎳柱好像堵了,每次開機要啟動好久,基線還漂移的很過分,平衡的時間越來越久,一上午都耗在等機子上了。」

      老師:「這個機器的鎳柱是剛換的,如果你樣品雜質顆粒處理的比較好,液料比也合適的話,就要看純化上清時蛋白質有沒有產生絮狀沉淀,盡快加入 DTT 還原。至于基線花長時間都不平的問題啊,同學們給我反映很多次了,但儀器用的太久了,我也很無奈。」

       

       

      我:「老師,我以前一直以為是我沒有找到軟件,怎么自動換算 AU 值,結果發現大家都是手動自己算的。」

      老師:「咱的這臺儀器都『老當益壯』這么久了,電腦也卡,啟動也慢,啥都得手動,但是換一臺全自動進口的實在是太貴,公共實驗室地方緊緊巴巴,便宜一點的吧,全是手動也不劃算,跟學院申請了很多次了,經費也有限,確實挺為難的。」

       

       

      我:老師還是厲害啊,但是 3 天要搞定實驗,實在有點為難,要如何才能搞定呢?

      老師:雖然我平時扣扣搜搜的,那也是沒辦法,這次我給你們特別準備了一臺全自動蛋白純化儀,完全滿足你們日常使用,勝任常規蛋白純化~

       

       

      我:全自動!!!

      老師:你趕緊掃下二維碼去試用吧,用的好就買,這臺儀器費用還可以,為師還有些經費能支持。
       

       這臺能入我老板法眼的蛋白純化儀究竟有何來歷:

      Blupadstart 蛋白純化系統,小巧緊湊的一體化設計,能夠開展各種常用的純化技術,如親和層析、離子交換層析、脫鹽和緩沖液交換,以及凝膠過濾,通過 Blupadstart、預定義模板或自定義方法實現全自動多蛋白純化,操作界面簡潔,流程直觀,滿足科研需求的同時讓一切簡單起來:

      • 開機即可檢測:緊湊型一體機,配備高清 10.1 寸觸摸屏點擊運行,開機基線即可平衡,無需預熱;

      • 檢測靈敏:標配 260/280 mm 固定波長,5 萬小時壽命 LED 冷光源,步進電機程序控制檢測系統;

      • 軟件功能強大:中英文操作界面可互換,UV、梯度譜線、溫度電導率、收集試管號同屏幕顯示,可實時監測,范圍廣、精度高,并可進行補償;

      • 獨立運行的餾分收集器:XY 軸模式,支持全收,按峰收集,美國進口進樣閥和三通收集閥,支持 Load、Inject、Waste 功能;

      • 實時修改運行參數:高精度恒流泵系統,可提供連續、穩定的精準流速(流速范圍 0.1~10 mL/min,最大耐壓壓力 3bar),支持實時在線修改梯度和流速;

      • 兼容所有層析填料Size Exclusion(SEC)-分子篩、凝膠過濾,(HIC和RP)-疏水和反相均可適應

      • 數據實時保存:實驗數據支持 Excel 導出,實時自動保存,可防止意外斷電導致的數據丟失。

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