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植物基因組DNA提取、酶切及電泳分析
  • 發布日期:2021-08-31     信息來源:      瀏覽次數:148
    • 那么下面上海嘉鵬科技有限公司為大家簡單介紹一下關于植物基因組DNA提取、酶切及電泳分析

      一、目的

      掌握植物基因組DNA提取的一般方法及注意事項。大分子量DNA分子的酶切分析。

      二、原理

      十六烷基三乙基溴化胺是一種去污劑,可溶解細胞膜,它能與核酸形成復合物,在高鹽溶液中(0.7mol/L NaCl)是可溶的,當降低溶液鹽濃度到一定程度(0.3

      mol/L

      NaCl)時,從溶液中沉淀,通過離心就可將CTAB與核酸的復合物同蛋白質、多糖類物質分開,然后將CTAB與核酸的復合物沉淀溶解于高鹽溶液,再加乙醇使核酸沉淀,CTAB能溶解于乙醇。

      三、試劑與器材

      (一)、試劑

      DNA extraction 500ml

      31.885g sorbitol (山梨醇)

      6.05g tris PH8.2 (一般不調)

      2Nuclei lysis buffer: 500ml

      100ml 1M Tris PH7.5

      100ml 0.25M EDTA

      200ml 5M NaCl

      10g CTAB

      100ml ddH2O

      35% sarkosyl (N-月桂酰肌氨基鈉鹽) 500ml

      用時,將上述三種溶液按110.4 比例混勻,加入亞硫酸氫鈉(3.8g/l),65℃預熱,既為抽提液。

      (二)器材

      恒溫水浴、研缽、電泳設備

      四、操作步驟

      (一)、基因組DNA提取

      0.15g左右小麥葉片,在液氮中研磨后放入1.5ml離心管中,加入700ml抽體液(65℃預熱)混勻,放入65℃水浴中,裂解40-60分鐘,期間溫和混勻幾次。

      取出裂解好的DNA ,加入700ml氯仿:異戊醇(241),猛烈混勻,離心(1000rpm10分鐘)。

      取上清于新管中,(不要混入氯仿),加入0.8-1倍預冷異丙醇,緩慢混勻后,再猛烈混勻,使DNA成團,-20℃放半小時以上。

      將析出的DNA 離心,14000rpm10分鐘。

      去掉上清,將沉淀用1ml 70% 乙醇清洗一次,離心 干燥,溶于50ml ddH2O

      (二)、酶切及電泳分析

      取四支1.5ml離心管,分別寫上標記:g/EcoRⅠ(學號)、g/HindⅢ(學號)、λ/EcoRⅠ(學號)和λ/ Hind Ⅲ(學號)。

      前兩支試管加入30 ml基因組DNA。后兩支試管加入3mlλ基因組DNA

      前兩支加入5 ml 10×buffer。后兩支加入2ml 10×buffer

      前兩支分別加入ddH2O 12.5ml,后兩支分別加入ddH2O 13ml

      分別加入RNase 1 ml

      前兩支試管分別加入1.5 ml EcoRⅠHind Ⅲ10000rpm離心20 S混勻。前兩支試管分別加入1 ml EcoRⅠHind

      10000rpm離心20 S混勻。

      37℃反應4h

      0.8%瓊脂糖凝膠電泳(樣品全部點樣)。

      觀察記錄并分析實驗結果

       

      以上就是上海嘉鵬科技有限公司為大家整理總結關于植物基因組DNA提取、酶切及電泳分析

       

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