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分子篩(凝膠過濾層析)蛋白純化系統的優缺點
  • 發布日期:2021-04-22     信息來源:      瀏覽次數:368
    • 那么下面上海嘉鵬科技有限公司為大家簡單介紹一下關于分子篩(凝膠過濾層析)蛋白純化系統的優缺點:

       

      分子篩定義:

       

      分子篩層析,又稱為凝膠過濾層析或體積排阻層析。分子篩層析是利用有一定孔徑范圍的多孔凝膠作為固定相,對混合物中各組分按分子大小進行分離的層析技術。具有分子篩作用的物質很多,如浮石、瓊脂、瓊脂糖、聚乙烯醇、聚丙烯酰胺、葡聚糖凝膠等。

       

      避開原因一:工藝放大困難

      分子篩層析無法遵循線性放大原則,即使遵循柱床高度不變的原則,工藝流速如何進行調整,也是需要面臨的問題。為保證良好的分離效果,分子篩層析需要求相對較高的裝填高度,然而裝填高度偏高,反壓也勢必會偏高。由于層析填料的耐壓有限,在保證不超壓的前提下,工藝流速會明顯受限,這會使得整個純化過程時間漫長。

       

      避開原因二:層析柱裝填困難

      在進行層析柱裝填時,勻漿液濃度需要在一定的范圍內(50%-70%),方可保證沉降均勻、柱效良好,這對層析柱的規格選型有著特殊要求。高度100 cm的層析柱,在勻漿濃度50%-70%時,假設壓縮系數為1.15,則實際使用高度為43.5-60.9 cm,這往往無法達到某些使用者的要求。若選配裝柱器,并考慮柱頭所占空間,這要求實驗空間需高度充足。若考慮將2根層析柱串聯使用,則要求2根層析柱的柱效相當,才可保證分離效果良好,這對裝填技術也有著較高要求。

       

      避開原因三:測定柱效困難

      常規柱效測定方法,要求平衡1.5-2 CV,進樣后,洗脫至出峰(參考值:2 CV),流速30 cm/h。若假設裝填高度為60 cm,平衡、洗脫體積總計3.5 CV,經計算,測定一次柱效,需耗時7小時。可以想象,當發現柱效不理想,需要重新裝填并測定柱效時,過程是很繁瑣、耗時的。

       

      避開原因四:維護保養操作困難

      當層析柱使用完畢,用20%乙醇保存時,同樣也很耗時。而且當再次使用時,用水將20%乙醇置換走,一般需要3 CV以上,而且由于該過程反壓較大,通常還需要降低流速進行。

       

      總之,采用分子篩層析,各個環節都很繁瑣、耗時,因此,在進行層析工藝設計時,要盡量避開分子篩層析。

       

      以上就是上海嘉鵬科技有限公司為大家整理總結關于分子篩(凝膠過濾層析)蛋白純化系統的優缺點。

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